标准品常见问题答疑（一）

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在分子诊断检测的各个环节的质量控制中，标准品/质控品必不可少。无论NGS、QPCR、数字PCR哪种平台，都依赖标准品来对检测结果的准确性、灵敏性进行评价。

标准品作为特征明确（如已知突变位点、突变频率），精准稳定的参照物质，为试剂盒开发的IVD企业、分子诊断的自建实验室LDT、第三方医检所ICL提供保障。同时，临检中心对各个检测中心组织室间质评时也用到标准品。此外，药企在药物研发过程中的伴随诊断也需要标准品。

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依托于科佰生物的上千种细胞样本库、基因突变数据库以及基因编辑技术，开发了普通肿瘤细胞系来源提取定标的标准品 及AI-Edigene® DNA系列通过基因编辑在基因组对特定目的基因的特定位置通过基因编辑的方式将野生型核酸序列改造为特定突变的编辑细胞系提取定标的标准品。AI-Edigene® RNA系列,通过重组表达的方式将特定突变(一般为融合突变)的cDNA引入阴性细胞系中，使转入的cDNA在细胞中转录为特定突变的RNA

举例：如提取已编辑过（理论上在一条染色体上编辑，突变频率AF为50%，两条染色体都编辑为100%）的EGFR C797S的细胞系的gDNA,接着一代sanger测序验证突变位点的存在，数字PCR对突变位点的AF进行绝对定量验证。

细胞系来源的标准品相较临床样本而言，具有可再生、批次稳定、成本低，可溯源，不存在医学伦理争议等优势；而相较于人工合成的DNA,质粒,PCR产物等因为具有完整的基因组或RNA序列，以及二级结构，另外除了改变目的突变的核苷酸序列，并不增加，减少或改变染色体的整体序列及结构，因此与临床样本又具有高度的相似性。

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科佰的分子诊断标准品从应用领域上分可分为五大领域：

肿瘤领域：3S3P1O (Mutaion/Fusion/CNV/Methylation/Panel/Pair/Package/Other)；

病原微生物：常见细菌、病毒、真菌等，比如HBV、HPV、新冠病毒等；

药物代谢：叶酸代谢、华法林、他莫西芬、他克莫司等等；

遗传病：地中海贫血、耳聋、SMA等；

药物研发领域：慢病毒整合位点标准品、宿主残留标准品等。

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gDNA：细胞系提取的带有特定突变的全基因组DNA;                  

RNA：细胞系提取的带有特定突变的总RNA;  

Cell Pellet  细胞培养后离心得到的带有特定突变的细胞沉淀；  

ctDNA：160bp±10%的DNA片段，模拟液体活检病人样本；由①gDNA超声打断或②酶切处理染色体后提取获得；可提供纯化后的ctDNA片段，也可以将ctDNA 按一定的浓度溶入人工血浆中模拟临床上未纯化的血浆样本；

FFPE Block：一定数量的特定突变细胞福尔马林固定，包埋形成石蜡块；

FFPE Slide：包埋好的石蜡块切成单片；

其他：灭活菌液、灭活病毒、假病毒、特定基质（如血清、粪便等）。

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Mutaion/Fusion/CNV/甲基化/药物代谢/地贫/耳聋/SMA等大多gDNA产品规格为1ug/管，浓度约40ng/ul左右（Qubit定量）；

RNA产品规格为1ug/管，浓度约60ng/ul左右（Nanodrop及qubit定量）；

Cell Pellet规格为细胞数量如1x10e6、5x10e6等；更多详细信息查看官网和产品目录，也可咨询我们的销售人员。

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目前基因检测标准品尤其是企业参考品主要用于企业在申报IVD临床实验前的方法学建立及性能验证，本身并不涉及报证，只要溯源清晰，各项性能验证符合预期，数据记录完整真实准确，即可纳入申请临床实验许可的提交材料中。

标准品（参考品）的溯源不止是指原材料的溯源，而是体现在标准品的整个生产过程中，是一个系统工程，具体涉及的内容包括但不限于原材料的来源，生产过程中的生产工艺步骤（样品的提取，稀释，标定等），数据的记录保存，产品的储存运输等各个环节，科佰依托于ISO9001和13485的质量体系，多标准品生产的各个环节均可以提供相应清晰准确真实的溯源材料。

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参考 从《指导原则》中分析参考品盘设计

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总体来说标准品的使用量是和应用场景和平台密切相关的，以NGS为例通常对于大多数NGS检测来说投入总量在几十到一两百ng 核酸，对于定量PCR或数字PCR来说一般投入量在10到数十ng，此外标准品每次的使用量还和检测目的基因的AF%及拷贝数密切相关，通常当AF%或拷贝数预期较低时，可能需要通过加大投入量来增加检出机率。